Engenharia genética em probióticos para ativação do sistema de RNA interferente (RNAi) em camarões: Uma potencial aplicação no controle de doenças virais
Autor: João Costa Filho (Currículo Lattes)
Orientador: Dr Luis Fernando Fernandes Marins
Resumo
As doenças infecciosas, principalmente de etiologia viral, tem sido o principal desafio da produção de camarão. A ativação do mecanismo RNAi (RNA de interferência) pode permitir o controle da replicação de viroses importantes na carcinicultura o WSSV (Vírus da Síndrome da Mancha Branca) e o IMNV (Vírus da Mionecrose Infecciosa). Os trabalhos descritos nessa Tese estão relacionados com o método de produção e entrega de dsRNA (RNA dupla fita) para o camarão branco do Litopenaeus vannamei, com o intuito de ativar o mecanismo do RNAi. Na tentativa de produzir dsRNA utilizando bactérias foi realizado sequenciamento genômico e manipulação genética em cepas nativas de Bacillus, bem como realizadas edições genômicas em B. subtilis através da técnica CRISPR/Cas9. No capítulo I foi sequenciado o genoma de duas cepas nativas de B. cereus, isoladas do trato gastrointestinal do caranguejo Ucides sp. coletado no Rio Pacoti em Fortaleza (CE). Esses resultados moleculares fornecem novas sobre essas cepas, bem como subsídios para manipulação genética. No capítulo II, uma cepa nativa de B. cereus foi manipulada geneticamente para produzir fluorescência (GFPmut1). Além disso, foi promovido seu fornecimento via ração e avaliação da colonização na mucosa do trato intestinal do L. vannamei. No capítulo III, foram criados plasmídeos para edição genômica em B. subtilis usando o sistema CRISPR/Cas9. Primeiramente o gene rnc foi nocauteado e, na sequência, foram integrados genes para produção de GFPmut1, dsRNA relacionadas com as viroses WSSV e IMNV, bem como dsRNA não relacionada. No final, foram produzidas duas cepas B. subtilis (JJBs5 e JJBs8) livres de resistência a antibióticos que estão prontas para serem testadas em bioensaios com desafio viral. Em conclusão, os resultados demonstrados nesse trabalho podem representar novas perspectivas na tentativa de mitigar os problemas com as doenças nos cultivos de camarão.